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          肌酐检测方法学大盘点及使用现状

          日期: 2021-08-24
          浏览次数: 799
          2021 - 08 - 24

          什么是肌酐?

          肌酐是一种低分子量的含氮化合物,由肌肉组织中的磷酸肌酸和肌酸通过非酶促、不可逆的脱磷酸反应生成的代谢终产物。肌酐仅由肾小球滤过进入原尿,不被肾小管重吸收。血中的肌酐来源包括外源性和内源性两部分,内源性肌酐每日生成量几乎保持恒定,严格控制外源性肌酐的摄入时,血肌酐浓度为稳定值,因此,血清肌酐浓度是评价肾小球滤过功能的重要指标。


          肌酐测定临床意义

          1.血清肌酐:改善全球肾脏病预后组织(KDIGO)指南推荐主要基于血清肌酐(Scr)计算的估算的肾小球滤过率(GFR),作为肾功能评估和肾损伤筛查的指标。

          2.尿液肌酐:尿肌酐与血清肌酐同时测定,用于计算肌酐清除率,以评价肾小球的滤过功能;尿微量白蛋白与尿肌酐比值(ACR)可作为慢性肾病诊断标志物。《中国糖尿病肾脏疾病防治指南》推荐2型糖尿病患者每年应至少进行一次UACR和eGFR检测,以便早期发现糖尿病肾脏疾病(DKD)。


          肌酐检测方法学

          目前检测肌酐的方法学主要有苦味酸法、酶法、放射性核素稀释质谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法和电极法等。

          1.?苦味酸法(Jaffe法)

          是检测肌酐最经典的方法,其原理是在碱性条件下肌酐与苦味酸反应生成橙红色结合物,在505-520nm波长处测其吸光度来反映肌酐的水平。该方法的优点是成本地低廉,操作简便,缺点是特异性不强,抗干扰能力差,易受血中很多“假肌酐”的干扰,如丙酮酸、胆红素、乙酰乙酸盐、葡萄糖、蛋白质等,这些物质也会与苦味酸发生有色反应从而影响肌酐的检测结果。虽然有些临床实验室使用改良的苦味酸法,但均或多或少存在各种问题。

          2.?酶法

          酶法主要包括肌氨酸氧化酶法与肌酐亚胺水解酶法。肌氨酸氧化酶法是通过肌酐酶的作用使肌酐水解成肌酸和尿素,肌酸又可经一系列反应生成H2O2等,最后偶联Trinder反应形成的醌亚胺色素与肌酐的浓度成正比,可用比色测定。肌氨亚胺水解酶法是通过肌酐亚氨基水解酶将肌酐水解,经一系列反应生成谷氨酸,通过测定340nm处的吸光度降低速率计算肌酐水平。酶法抗干扰能力相对较好且交叉污染相对少,但试剂成本相对较高。

          3.同位素稀释质谱法

          该方法的原理是将已知丰度与质量的同位素稀释剂与样本混合,用质谱检测混合前后样本丰度的变化,求得样本中某种元素水平的方法。该方法具有很高的特异性,而且精密度与准确度也非常好,不产生系统误差,是检验临床指标量值最常用的参考方法,但由于该方法的检测成本较高和辐射污染等问题,通常只用于产生一级参考测量程序、评价参考方法和对自己标准品定值。

          4.高效液相色谱法(HPLC

          HPLC通过阳离子交换层析柱将肌酐分离出来,再测得其在233 nm处的A值,从而检测出血肌酐水平。该方法的精密度和准确度高,特异型好,但检测过程比较繁琐,并不适合用于临床大批量样本的检测,通常作为肌酐测定的参考方法。

          5.毛细管电泳法

          毛细管电泳法是通过毛细管电泳将血清中的肌酐分离出来,然后检测234 nm处的吸光度计算肌酐值。该方法效率高,样本用量少,分析速度快,并可排除体内“假肌酐”对血肌酐测定的干扰。但毛细管内壁易吸附蛋白质,导致该法的重复性较差,因此不适用于临床常规检测。

          6.电极法

          电极法是通过半酶法,利用离子选择性电极对肌酐进行测定的一种方法。该方法虽然操作比较简单,速度也较快,但抗内源性物质干扰的能力较差,故在临床上也并不常用。


          我国室间质评情况

          目前在国家药监局网站获得肌酐检测注册证的厂家所采用的方法学主要为苦味酸法和酶法,其中注册苦味酸的厂家约60余家,注册酶法的厂家约有200余家,参加室间质评的单位主要也是使用的苦味酸法和酶法。

          通过对全国1402家实验室发放的5个不同浓度批次的质评物进行肌酐检测的室间质评调查,按照2种检测方法(苦味酸法和酶法)和11套检测系统分组,结果分析中,苦味酸法组CV范围为1.03~18.23%,酶法组CV为1.5~8.08%,肌酐不同检测系统试验室间变异情况酶法组优于苦味酸法组。

          在广东2014年室间质评中,第一次室间质评有71家实验室使用苦味酸法,52家使用酶法,第二次有37家使用苦味酸法,64家使用酶法。第一次室间质评苦味酸法和酶法能力比对检验(PT)合格率分别为57.46%和83.85%,第二次分别为83.78%和97.19%,苦味酸法检测的变异系数在6.67%~19.26之间,酶法变异系数在3.78%~11.43%之间,可以看出酶法检测肌酐的质量明显优于苦味酸法。

          在对天津109家实验室室间质评结果分析中,测定高值质控品苦味酸法和酶法平均CV分别为8.7%和3%,低值质控平均CV分别为34.3%和9.3%,可见基质效应对肌酐测定结果尤其是苦味酸法检测低值质控影响很大,酶法测定结果显著优于苦味酸法。

          小结

          通过肌酐注册和实验室使用情况来看,目前检测肌酐主要使用的方法学为苦味酸法和酶法,两种方法各有优劣势,苦味酸法检测成本低,但干扰因素多,而酶法虽成本更高,但结果准确性和重复性更好,线性范围更宽,因此推荐有条件的实验室可使用酶法检测肌酐。

          国赛现已获肌酐检测试剂盒注册证,使用的方法为肌氨酸氧化酶法,用于Aristo U和Aristo Ur检测系统,可联合多种散射比浊法尿特定蛋白在同一台仪器上检测,同时出具ACR和各尿蛋白的检测结果,并可以尿液流水线轨道联机,实现一管尿液多项检测,为肾脏病的诊断提供更简便、更完善的解决方案。

          肌酐检测方法学大盘点及使用现状

          肌酐检测方法学大盘点及使用现状

          参考文献

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